尼康A1+型共聚焦显微镜快速操作手册
来源：冰点文库下载，13 页，共聚焦四大家资料-尼康第 6 个完成 适用设备：Nikon A1+ 共聚焦激光扫描显微镜 软件平台：NIS-Elements AR + A1plus Compact GUI
一、文档概述
本手册为尼康 A1+ 型共聚焦显微镜的快速操作入门指南，以图文标注形式讲解从开机到图像输出的完整操作流程，覆盖 12 个核心操作章节（缺第 7 章）。
章节结构：
| 章节 | 主题 | 所在PDF页 |
|---|---|---|
| 1 | 开关机 | 第2页 |
| 2 | 打开软件 | 第3页 |
| 3 | 多通道成像流程（405/488/561/640） | 第4页 |
| 4 | 成像参数设置 | 第5页 |
| 5 | 图像显示和调节 | 第6页 |
| 6 | 图像的保存和输出 | 第7页 |
| 7 | （缺失） | — |
| 8 | 多维图像拍摄之Z轴序列成像 | 第8-9页 |
| 9 | 多维图像拍摄之大图拼接 | 第10页 |
| 10 | 透射光”DIC”图像拍摄 | 第11页 |
| 11 | 光谱成像（CB模式） | 第12页 |
| 12 | 光谱成像（VB模式） | 第13页 |
二、开关机（第1章）
核心规则：按标签序号顺序开机，倒序关机。
| 序号 | 部件 | 操作要点 |
|---|---|---|
| 1 | 荧光亮度调节 | 显微镜主体上部调节旋钮 |
| 2 | 荧光开关 | 显微镜主体白色模块开关 |
| 3 | 激光器 | 先开后面的开关，再转动钥匙完成开启 |
| 4 | 共聚焦开关 | 设备左侧开关 |
| 5 | 电脑主机 | HP Z440 工作站 |
- 开机顺序：1 → 2 → 3 → 4 → 5
- 关机顺序：5 → 4 → 3 → 2 → 1
三、软件界面（第2章）
软件界面分为以下功能区域：
| 区域 | 位置 | 功能 |
|---|---|---|
| 显微镜控制 | 左侧上方 | 显微镜硬件参数控制 |
| 图像显示调节 | 左侧下方 | 图像亮度/对比度/LUT 调节 |
| 布局切换 | 最左下角 | 切换界面布局 |
| 图像窗口 | 中间上方 | 主图像显示区 |
| 缩略图面板 | 中间下方 | 已拍摄图像缩略图 |
| 共聚焦成像参数设置 | 右侧偏左 | A1plus Compact GUI，通道/扫描参数设置 |
| 扫描区域缩放旋转 | 右侧上方 | A1plus Status Area，Zoom/Rotation/分辨率 |
| 多维拍摄 | 右侧下方 | ND Acquisition，Z/Time/Large Image 等多维采集 |
A1plus Compact GUI 核心按钮：Scan（扫描）、Capture（采集）、Find（预览）、Eye Port（目镜切换）
默认通道配置：DAPI（405nm）、GFP（488nm）、DsRed（561nm）、Alexa（640nm）
四、多通道成像流程（第3章）
405/488/561/640 四通道荧光成像操作步骤：
- 勾选通道：在通道列表中勾选需要拍摄的荧光通道
- 切换观察模式：点击「Eye Port」切换到肉眼观察，找好视野后再次点击切回共聚焦
- 预设扫描参数：设置扫描速度、扫描分辨率
- 预览：点击「Find」呈现预览图像
- 预览期调整：
- 调节各通道参数（详见第4章成像参数设置）
- 调整图像焦点和视野
- 采集：点击「Capture」自动获取多通道图像
- 查看结果：已拍摄图像出现在「Opened Image」面板中
Tips：在图像上滚动鼠标滚轮可以调焦；鼠标左键拖拽可以移动载物台（视野）。
五、成像参数设置（第4章）
5.1 扫描参数
| 参数 | 设置建议 | 说明 |
|---|---|---|
| 扫描速度 | — | “1”最快，往右速度渐慢 |
| 扫描分辨率 | 1024 | 常规成像选择 1024 |
| 扫描平均 | Normal（关闭） | 多次扫描平均降噪，下拉选择平均次数 |
| Ch Series | 按下（推荐） | 多荧光通道顺次成像，防止串色；否则同时成像 |
5.2 针孔设置
- 推荐值：1.2 AU
- 可根据图像质量适当调节
5.3 检测器与激光参数
| 参数 | 设置建议 | 说明 |
|---|---|---|
| HV（检测器灵敏度） | 控制在 100 以下 | 滚动条或直接输入数值；100 以下信噪比好 |
| Offset | 默认 0 | 不建议调整 |
| 激光功率（如 488） | 越小越好 | 在保证信噪比的前提下尽量降低 |
调节技巧：HV 和激光功率调节时，滚动条上鼠标滚轮为微调，鼠标左键为粗调。
六、图像显示和调节（第5章）
6.1 通道显示
- 点击图像窗口底部通道标签（RGB / Red / Green / Blue）切换显示不同通道
- 「平铺显示各通道」按钮可将多通道分开平铺展示
6.2 亮度对比度调节
| 操作 | 效果 |
|---|---|
| 左侧竖线往右拖动 | 去除弱信号（去背景） |
| 右侧竖线往左拖动 | 图像整体亮度增加 |
| 斜线（伽马值）往下拖动 | 降低弱信号（降低背景） |
| 按住 Shift 键 | 单独控制每个通道 |
- 「自动亮度对比度」按钮可一键自动调节
- 过曝指示：开启后过曝区域以指定颜色标识，指示色可下拉选择
- 「添加标尺」按钮可在图像上添加长度标尺
七、图像保存和输出（第6章）
7.1 保存为 nd2 原始格式
- 操作：File → Save as
- 格式：
.nd2（Nikon 原始格式，包含全部参数和测量信息）
7.2 导出为 Tiff 格式
- 操作：File → Save / Export to Tiff…
导出设置要点：
| 设置项 | 选项 | 说明 |
|---|---|---|
| 输出模式 | Multiple Files | 批量输出 |
| 格式 | Standard TIFF | 标准 Tiff 格式 |
| 维度拆分 | Split to Multiple Files | 各通道生成不同文件 |
| 位深 | 8 bit 或 16 bit | 根据需要选择 |
| 单通道彩色 | RGB Image for Each Channel | 生成单通道彩色图像 |
| 叠加图像 | All Channels Merged to RGB Overlay Image | 生成多通道叠加图像 |
| 嵌入标尺 | Burn Scale | 在图像中嵌入标尺 |
| 应用 LUT | Apply saved LUTs | 应用图像调节效果 |
八、Z轴序列成像（第8章）
8.1 拍摄操作
- 勾选 Z 轴：在 ND Acquisition 中勾选 Z 轴拍摄标签
- 设定厚度范围：
- 调焦至样品最上层 → 点击「Top」
- 调焦至样品最底层 → 点击「Bottom」
- 确认厚度：Range 区域自动显示样品总厚度
- 设置步进/层数：
- 点击步进按钮 → 填入推荐 Z 轴步进 → 软件自动计算层数
- 或手动输入层数 → 软件自动计算步进
- 拍摄：点击「Run now」自动拍摄 Z 轴序列
Tips：若对 Z 轴分辨率要求不高，可将推荐层数除以 2~2.5，牺牲分辨率换取速度。
8.2 Z 轴序列显示方式
| 视图模式 | 功能 |
|---|---|
| 普通视图 | 滚动或自动播放不同层面 |
| 剖面视图 | 定位兴趣点，下方/右方显示横/竖切面 |
| 立体视图 | 支持旋转、切割、录制视频 |
| 平铺显示 | 所有层面平铺展示 |
| 最大强度投射（MIP） | Z 轴所有层叠加显示 |
保存视图方法：Edit → Create view snapshot 8bit → 生成新 nd2 文件 → 另行保存
九、大图拼接（第9章）
前提：需要电动载物台
- 勾选 Large Image：在 ND Acquisition 中勾选大图拼接标签
- 设置拼接视野：
- 以视野为单位：如 3×3 fields
- 以实际长度为单位：如 6.0×6.0 mm
- 自定义 Pattern 模板
- 拍摄：点击「Run now」
拼接参数：
- Overlap：15%（重叠率）
- Stitch / Do Not Stitch：是否实时拼接
- Stitching 参考通道：第一个 lambda 通道
Tips：Z 轴和 Large Image 等标签可同时勾选组合使用，获取多维大图。
十、透射光 DIC 图像拍摄（第10章）
- 打开光路设置窗口
- 将透射光检测器移入光路
- 点击 OK 确认
- 透射光（TD）通道出现在通道列表中，勾选该通道
- 检偏镜移出光路（Out）
- 选择 DIC 棱镜：常规物镜选 N2，10x 物镜选 N1
- 预览、拍摄
十一、光谱成像——CB模式（第11章）
CB = Channel Band（通道波段模式，连续光谱采样）
- 点击切换到「CB」模式
- 设置光谱成像的波长范围
- 设置光谱分辨率（波长采样间隔）
- 预览图像，调节光谱检测器的 HV
- 预览图像，调节各激光功率
- 边预览边调整图像焦点和视野
- 点击「Capture」自动获取多通道光谱图像
- 已拍摄图像出现在「Opened Image」面板中
Tips：图像上滚动鼠标滚轮可调焦；鼠标左键拖拽可移动载物台。
十二、光谱成像——VB模式（第12章）
VB = Virtual Band（虚拟通道模式，自定义发射波长范围）
- 点击切换到「VB」模式
- 调节每个虚拟通道的波长范围（DAPI/FITC/TRITC/Cy5 等）
- 预览图像，调节光谱检测器 HV、虚拟通道增益、激光功率
- Offset 保持默认 0，可不调
- 边预览边调整图像焦点和视野
- 点击「Capture」自动获取多通道图像
- 已拍摄图像出现在「Opened Image」面板中
典型虚拟通道配置：
| 通道 | 激发波长 | 发射波长范围 |
|---|---|---|
| DAPI | 405.0 nm | 410 – 480 nm |
| FITC | 488.0 nm | 450 – 560 nm |
| TRITC | 561.0 nm | 565 – 635 nm |
| Cy5 | 640.0 nm | 650 – 720 nm |
十三、操作速查表
| 操作场景 | 关键步骤 | 核心参数 |
|---|---|---|
| 开机 | 5步顺序开启 | 激光器先开电源再转钥匙 |
| 常规成像 | 选通道→找视野→预览→调参数→采集 | HV<100, 针孔1.2AU, Ch Series 开启防串色 |
| Z栈成像 | 设Top/Bottom→设步进→Run | 推荐步进可除以2~2.5提速 |
| 大图拼接 | 选视野数→设置重叠率→Run | 重叠率15%，可与Z轴组合 |
| DIC成像 | 移透射光检测器→检偏器Out→选棱镜 | 10x选N1，其余选N2 |
| 光谱成像 | CB连续/VB虚拟→设波长范围→采集 | CB适合光谱分析，VB适合多通道定量 |
| 保存 | nd2原始/Tiff导出 | nd2保留全部参数，Tiff可选位深和通道拆分 |