Leica TCS SP5 激光共聚焦显微镜系统软件操作手册

徕卡 TCS SP5 激光共聚焦显微镜软件操作的中文精简手册，覆盖日常最常用的 4 种成像模式操作流程。

一、软件默认状态

打开软件后，默认进入 Acquire 面板的 acquisition 模式：

常用扫描模式：

推荐设置：

一般在扫描结束后统一保存；为防止数据丢失，也可从获取第一张图片开始，每获取一张保存一次。

进入 Acquire 面板的 Experiment 中 → 右键点击 Experiment → 选择 “Save Experiment as…” → 保存 .lif 文件到指定文件夹并命名。

单通道图片：右键点击 Experiment → 选择 “Export Experiment as tiff” → 选择目标文件夹 → 选中 rawdata 导出单通道图片
多通道合成图（overlay）：再次右键点击 Experiment → 选择 “Export Experiment as tiff” → 选择目标文件夹 → 选中 overlay 导出合成图片

在 beam path setting 的 load/save single setting 中选择对应荧光的光路设置
点击 live 开始连续扫描，优化图像质量：
- 调节 z position 选择扫描层面
- 调节 gain 和 offset 使图像亮度和背景达到合适状态
- Zoom 调节电子放大倍率
- 点击 stop 停止扫描
选择像素 1024×1024
点击 capture image 获取图像
保存图像

点击 seq，出现 sequential scan 面板
在 sequential scan 面板中点击 scan 1 → 在 beam path setting 中选择第一种荧光光路设置
- 点击 live 优化图像质量（z position / gain / offset / Zoom）
- 点击 stop 停止
点击 ”+” 添加 scan 2 → 选择第二种荧光光路设置 → 同样优化质量
- 标记了几种荧光就添加几种方法
选择 “between frames” 模式（帧间切换，减少串色）
选择像素 1024×1024 → 点击 Start 获取图像
保存图像

在 beam path setting 中选择荧光光路设置
打开 Z-stack 面板
点击 live 开始连续扫描：
- 调节 z position 选择扫描层面
- 设置 begin 和 end（扫描起止位置）
- 调节 gain 和 offset / Zoom
- 点击 stop 停止扫描
在 Z-stack 面板中确定 Nr. Of steps（需扫描的张数/步数）
点击 start 获取图像
如需叠加：Process 面板 → 选择 visualization → 3D projection → 点击 apply 生成叠加图像
保存图像

Acquisition mode 改为 xyt
根据时间间隔和图像质量要求，调整 format 和 line average 值
在 beam path setting 的 load/save single setting 中选择荧光光路设置
- 多种荧光则点击 seq 设置序列扫描
点击 live 优化图像质量（z position / gain / offset / Zoom）→ stop
点击 start 获取图像
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