流式细胞仪仪器质控需求说明更新
文档版本：更新版（在2017-09-19版基础上细化流程+界面调整） 项目：流式细胞仪用户软件 - 仪器质控模块 关联文档：流式细胞仪质控流程说明-20170919（基础版本）
一、仪器质控流程
1. 质控物
- 质控物：Calibrite Beads（6种微球）
- 1种未标荧光素的阴性微球
- 5种标记单色荧光素的单标微球（FITC / PE / ECD / CY5 / CY7）
- 各通道靶值已知，标定起始电压已知
2. 上样试管数：6管
| 试管 | 内容 |
|---|---|
| 1 | 阴性微球 |
| 2 | FITC 单标微球 |
| 3 | PE 单标微球 |
| 4 | ECD 单标微球 |
| 5 | CY5 单标微球 |
| 6 | CY7 单标微球 |
3. 单个试管质控流程
设置8个直方图 + 门模板（门位置 = 靶值 ± 20%）
↓
正常上样读数，调节电压
每2秒比较荧光强度中位数 vs 靶值
不相等 → 继续调电压
相等 → 保存电压值，开始记录5000个粒子
↓
达到5000个，保存：荧光强度中位数 + 电压值
↓
判定：实测中位数在靶值 ±5% 偏差以内 → 质控通过
4. 完整操作步骤
（1）样品准备
6支干净试管，每支加 1mL 缓冲液 + 1滴对应微球，震荡混匀。
（2）样品上样
仪器正常开机后，6支试管依次上样。
（3）逐管电压调整与数据记录
| 试管 | 主调通道 | 记录电压 | 记录荧光强度（5000粒子中位数） | 查看CV |
|---|---|---|---|---|
| 1（阴性） | 前向散射光 | FSC增益电压 | VFSC + VFITC₁ + VPE₁ + VECD₁ + VCY5₁ + VCY7₁（暗噪声） | FSC直方图CV |
| 2（FITC） | FITC | FITC增益电压 | VFITC₂ + VPE₂ + VECD₂ + VCY5₂ + VCY7₂ | FITC直方图CV |
| 3（PE） | PE | PE增益电压 | VFITC₃ + VPE₃ + VECD₃ + VCY5₃ + VCY7₃ | PE直方图CV |
| 4（ECD） | ECD | ECD增益电压 | VFITC₄ + VPE₄ + VECD₄ + VCY5₄ + VCY7₄ | ECD直方图CV |
| 5（CY5） | CY5 | CY5增益电压 | VFITC₅ + VPE₅ + VECD₅ + VCY5₅ + VCY7₅ | CY5直方图CV |
| 6（CY7） | CY7 | CY7增益电压 | VFITC₆ + VPE₆ + VECD₆ + VCY5₆ + VCY7₆ | CY7直方图CV |
关键：每管除主调通道外，其余4个荧光通道的串扰强度同时记录（用于后续补偿矩阵计算）。
（4）绘制质控曲线
- 判定标准：实测值在靶值偏差 ±5% 以内
- 纵坐标刻度：3个刻度（靶值-靶值×5% / 靶值 / 靶值+靶值×5%）
- 绘制内容：质控折线图 + CV值 ≤ 5%
- 暂不采用 Levey-Jennings 规则（与2017-09-19版相比有变化）
（5）计算荧光补偿矩阵
将6管数据代入荧光补偿矩阵计算表格：
- 试管1 → 暗噪声强度（基线）
- 试管2~6 → 各单标微球在5个荧光通道的强度值
- → 得到完整的5×5荧光补偿矩阵
算法原理参见：荧光补偿算法-液相芯片多色荧光检测
二、质控图
- 显示各通道荧光强度靶值与实际测量值对比
- 折线图形式，±5% 偏差带
三、质控报告
（文档此处为标题占位，无详细内容）
四、仪器质控界面布局修改
在11月1日沟通基础上对原界面进行修改：
主要修改点
| 序号 | 修改项 | 说明 |
|---|---|---|
| 1 | 基本信息区 | 二维码扫描 + 文件导入功能移到基本信息处 |
| 2 | 通道参数合并 | 通道靶值 + 质控参数两部分合并为同一张表（通道/项目/电压标定起始电压3项） |
| 3 | 上样模式选择 | 仪器控制区新增：单管 / 多管 / 微孔板 三种模式 |
| 4 | 单管模式提示 | 单管模式下启动后弹出”放置FITC试管”提示框，完成依次提示下一个 |
| 5 | 多管/微孔板模式 | 试管放固定位置，点击开始后不弹提示，直到全部测量完毕 |
| 6 | 开始/停止按钮 | 合并为一个按钮 |
| 7 | 通道质控状态 | 新增各通道状态显示：等待 / 正在进行 / 完成 三种 |
| 8 | 激光功率命名 | ”红色激光功率” + “绿色激光功率” → 统一改为 “激光功率” |
| 9 | 质控图布局 | 采用靶值±5%偏差判断，纵坐标3刻度，绘制质控折线 |
关键差异对比（vs 2017-09-19版）
| 对比项 | 2017-09-19版 | 更新版 |
|---|---|---|
| 质控判定 | FlowCheck ±5% + Levey-Jennings曲线 | 暂不采用 Levey-Jennings，仅用 ±5% |
| 质控物 | FlowCheck 微球 | Calibrite Beads（6管法） |
| 补偿矩阵 | 5色荧光补偿矩阵计算 | 明确6管数据输入 + 矩阵计算表格 |
| 上样模式 | 未明确 | 单管/多管/微孔板 三种 |
| 界面状态 | 未提及 | 新增通道质控状态（等待/进行/完成） |
| 激光功率 | 红/绿双色 | 统一为”激光功率” |
关联笔记
- 流式细胞仪质控流程说明-20170919 — 基础版本
- 荧光补偿算法-液相芯片多色荧光检测 — 补偿矩阵算法原理
- 流式细胞仪详细设计说明书-CLFCS-V1.0 — 系统总体设计
- 流式细胞仪荧光补偿模块需求确认-20170421-王继帅钟金凤 — 补偿模块接口