共聚焦显微镜-奥林巴斯 FV1000 操作讲义（周报版）

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定位

这是 FV1000 控制面板（Ocular / FV10-ASW 软件）的实操步骤讲义，与既有笔记互为补充：

• Olympus-FV1000共聚焦显微镜硬件用户手册（硬件原理）
• 奥林巴斯FV1000激光共聚焦显微镜简易使用说明书（系统说明书）

本讲义的特点是”照着做”的分步操作卡，覆盖：Z 栈采集、光谱带宽优化、Lambda 光谱扫描与解卷积、图像导出、血流成像入口。

核心操作流程

1. Z 轴上下限设定（Z-stack 序列）

1. 采用前期步骤调好 XY 焦点。
2. 输入 Step Size 大小（点 OP 按钮可用推荐值）。
3. 点 XY Repeat 开始往复扫描。
4. 用上下箭头按钮上移焦点，图像到达上限时点 Set 确定。
5. 反向操作定下限，点 Stop 停止。
6. 选 AutoHV、选扫描速度（速度越慢，同等亮度下背景噪声越低；可开 Kalman 累加）。
7. 选 Depth → 点 XYZ 取像 → Series Done 回到 2D Live 界面。

2. 光谱带宽优化（光谱探测器狭缝）

• 打开光谱设置窗口，示例：CHS1 带宽设 10 nm。
• XY Repeat 边扫描边拖动光谱带至目标荧光最亮位置，带宽保持 10 nm 不变（对应附录 4 的带宽改变方法）。

3. Lambda 扫描与光谱解卷积（Spectral Deconvolution）

• Lambda 模式：点 XYL 取像，Series Done 后回 2D 界面；oib/oif 为 FV10-ASW 专用格式。
• 双标解卷积（Alexa Fluor 488 + YOYO1）：
  1. 打开双标 XYL 图像；
  2. 分别为两种荧光选定封闭 ROI 区域；
  3. Processing 菜单 → Spectral Deconvolution；
  4. 双击 ROI1/ROI2，处理类型 Normal，Execute；
  5. 得到拆分后图像。
• 参考光谱建立：对单标样品同样选 ROI 后执行，点 Save Profile 把该荧光光谱存入数据库；每种荧光单标各做一遍。
• 界面元素：ROI（不同形状）、网格、比例、开始/结束帧选择。

4. 图像导出

• 分通道存 TIFF：图像管理器右键 → 另存为 → Save as TIFF（BMP/JPEG 亦可）。
• 通道合并图存 TIFF 步骤相同。

5. 主控制面板要点（OCR 自软件截图，界面字段归纳）

• Average：None / Line / Frame / Times；Kalman 累加选项。
• Sequential Scan：None / Line / Frame。
• Type：Galvano / Resonant（振镜/共振扫描切换）。
• Speed 示例 0.067 μs/pixel；Pixel/Line/Frame 时间自动换算（512×512 帧约 33 ms）。
• Dye & Detector Select：染料-探测器配置（HSD 光谱探测器，如 HSD3 455-510 nm、HSD4 522-599 nm），HV 高压逐通道设定（如 862 V / 752 V）。
• Confocal Aperture（针孔）Airy Disk 百分比、Zoom、Rotation、Pan X/Y、High voltage correction ON/OFF。
• 另有 Blood Flow（血流成像）预设模块（ECIP/EWP 组件 + Blood Flow Settings）。

可行动点 / 备注

• 若做共聚焦软件需求调研，本讲义给出的”步骤卡 + 面板字段清单”可直接作为用户操作场景用例来源。
• OCR 局限：截图中按钮图标与部分数字识别失真，具体电压/带宽数值以原文手册为准（待确认项：示例中 HV 数值仅为该机当时配置，非推荐值）。