HBV qPCR 引物对比实验-94-55-65度退火（2021-07-05）
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/工作相关/qpcr 参考/zcs/exp/乙肝/94-55-65度-HBV-20210705.xlsx。文件名即退火温度程序 94/55/65°C，是同日 94-60-65 度实验的姊妹组（见关联）。
实验设计
- 96 孔板，FAM（HBV 目标基因）+ HEX（内源参照/内标）双通道
- 第 7 列（B7-G7）为引物对比区，每孔单复孔排布：
- B7/C7 = 引物1，D7/E7 = 引物4，F7/G7 = 引物文献（文献引物对照）
- A5/A6/B5/B6/C5/C6 有低值 Ct（15.3-16.8），疑似阳性对照或污染监测孔（HEX 通道 15.3-16.8 段在内参列，数值异常偏低，待确认）
关键结果（FAM-HBV，第7行引物区）
| 孔位 | 引物 | Ct |
|---|---|---|
| B7 | 引物1 | 22.637 |
| C7 | 引物1 | 22.512 |
| D7 | 引物4 | 22.488 |
| E7 | 引物4 | 22.512 |
| F7 | 引物文献 | 21.621 |
| G7 | 引物文献 | 22.004 |
- 三组引物 Ct 均在 21.6-22.6 区间，重复孔间差异 <0.4，组内重复性好
- 文献引物 Ct 略低（21.6/22.0），扩增效率略优于自建引物1/引物4，但差异 <1 个循环，无显著劣势
- 复孔 Ct 标准差 0（统计表单孔无重复统计意义）
数据结构（qPCR 结果导出格式参考）
- 「结果」sheet：孔位/样本编号/样本名称/样本类型/荧光/目标基因/Ct/浓度/浓度单位/标准浓度/参比荧光/唯一性编号/重复组/QC
- 「统计」sheet：按重复组聚合的 Ct 平均值/标准差/CV%、浓度及 Log 浓度的均值/标准差/CV%
- 大量空白孔输出”待测/-/通过”占位行——软件导出时不过滤空孔
关联
- 94-60-65度-HBV-20210705（同实验不同退火温度组）
- 790合成引物-20210708